【Transfection 如何省經費?】
NTRII 轉染試劑產品 (NTRII, #JT97-N002S)，具有高效能、低價位及高品質等特點。其價格為一般市售商品的1/3~1/5倍，因為適用於大部份的細胞株 (效能如下所示)，所以廣受研究單位所使用。其使用的比例較PJ牌為低，用量很省，一般的細胞株其用量為1ug DNA: 2ul NTRII。因其毒性比Liposome低，因此更適用於primary cell。建議客戶使用便宜的NTRII來轉染細胞株。遇見難以轉染的細胞株，例如巨噬細胞、肌肉細胞、心肌細胞，再用高價位的轉染試劑，或是病毒等方式來進行。此產品在中研院、國衛院、台大等單位都一直使用。若須試用品100ul試用,請洽各區域業務。
LentiVirus病毒蛋白於293T細胞株的產製，應用傳統方式，以10公分培養基，須要10ugDNA的濃度。中研院客戶使用NTRII轉染包裝載體於293T細胞株，每10分培養基，只須4ug的DNA用量。應用NTRII轉染試劑來表現Lentivirus蛋白，其方法簡單、DNA用量少、具有高病毒蛋白的表現量。
【轉染試劑產品介紹】
T-Pro Non-liposome transfection Reagent II 對各種不同的細胞株進行轉染測試，其效果都很好。其中包括肝癌細胞HepG2、Huh7; 乳癌細胞株MCF7; 神經細胞株N 2A ; HEK293, 293T, 293E, BHK, CHO懸浮或貼附, COS1, COS7, HeLa, Vero, L929, NIH 3T3, Human Foreskin Fibroblasts (HFF) primary cells, Bovine Aorta Endothelial cells(BAEC), Sf9及Sf21昆虫等常用細胞株。
【NTRII產品特點】
- 不具細胞毒性 ----更適用於Primary cell。
- 在廣泛的細胞株測試中皆具有極佳的轉染效果 -----好轉的細胞株，就用便宜的轉染試劑。
- 可在有血清環境下使用具有極佳的轉染效果 ----不須6小時後更換medium
- 可產生大量的重組蛋白 ------Lentivirus病毒產製，10公分dish只須4ug DNA: 10ul NTRII
- 操作步驟簡單快速 ----比Lipofetamin2000簡單
- 無論對於貼附性細胞或是懸浮性細胞皆具有極佳的轉染效果
【操作指南】
哺乳動物細胞基因轉染的操作流程：
1.對於貼附型細胞
細胞之數量(見表1)：細胞應於轉染前18至24小時前培養，以確保細胞數量可以在轉染前密度達約40~90％之單層
細胞狀態並於轉染前0.5-2小時前將細胞培養液更新。在轉染時，請使用含血清之細胞培養液，但於某些特殊情形下，
可使用不含抗生素之無血清培養液或血清少於5％之培養液，可改善重組蛋白的表現量或有助於轉染之效果。
T-Pro Non-liposome transfection Reagent II -DNA複合物的製備和轉染操作步驟
1. 對於不同的細胞型態，T-Pro Non-liposome transfection Reagent II (μl)：DNA (μg)較佳的比例為1：1~4：1。
在一開始時，我們採用的比例為2：1，且通常可以得到滿意的轉染效率且不具細胞毒性。在某些特殊狀況下，可嘗試改變混
和比例以達到最佳轉染效果。為了確保混合物的最佳效果，我們建議採用不含血清及抗生素之細胞培養液或HBS buffer
(pH7.4 150m M NaCl, 20m M HEPES) 對DNA及T-Pro Non-liposome transfection Reagent II進行稀釋。以下轉染操作
流程適用於24孔細胞培養盤，其他培養盤之用量可依據其體積稍作調整，在表2有提及其他形式培養皿的轉染條件可供參考。
2. 以24孔細胞培養盤每孔為例，將1μg的DNA與30μl (不含血清及抗生素之細胞培養液)或HBS buffer
(pH7.4 150mM NaCl, 20mM HEPES)混合。
3. 取2μl的T-Pro Non-liposome transfection Reagent II 加入步驟2中DNA之混合物進行混合，經混合後於室溫下靜置15分鐘。
4. 再將步驟3之混合物均勻滴於盤內(含有細胞及血清培養液)，並以前後左右搖晃的方式使其均勻混合。
5. 將轉染後之細胞置於37℃ 含5％ CO2的培養箱中培養。
6. 經18至48小時後確認轉染及表現效率。
注意：若需轉染其他多孔盤或培養皿時，請將所需體積等比例放大或縮小。
2.對於懸浮細胞
細胞數量：懸浮細胞於轉染當天將細胞置換於新的培養液中並將其數量控制在0.5-1× 106 c ells/ml間。
T-Pro Non-liposome transfection Reagent II -DNA複合物的製備和轉染操作步驟
1. 對於不同的細胞型態，T-Pro Non-liposome transfection Reagent II (μl)：DNA (μg)較佳的比例為1：1~4：1。在一開始時，我們採用的比例為2：1，且通常可以得到滿意的轉染效率且不具細胞毒性。在某些特殊狀況下，可嘗試改變混和比例以達到最佳轉染效果。為了確保混合物的最佳效果，我們建議採用
不含血清及抗生素之細胞培養液或HBS buffer(pH7.4 150m M NaCl, 20m M HEPES)對DNA及T-Pro Non-liposome transfection Reagent II進行稀釋。以下轉染操作流程適用於24孔細胞培養盤，其他培養盤之用量可依據其體積稍作調整，在表2有提及其他形式培養皿的轉染條件可供參考。
2. 以24孔細胞培養盤每孔為例，將1μg的DNA與60μl (不含血清及抗生素之細胞培養液)或HBS buffer(pH7.4 150mM NaCl, 20mM HEPES)混合。
3. 取2μl的T-Pro Non-liposome transfection Reagent II 加入步驟2中DNA之混合物進行混合，經混合後於室溫下靜置15分鐘。
4. 再將步驟3之混合物均勻滴於盤內(含有細胞及血清培養液)，並以前後左右搖晃的方式使其均勻混合。
5. 將轉染後之細胞置於37℃ 含5％ CO2的培養箱中培養。
6. 經18至48小時後確認轉染及表現效率。
注意：若需轉染其他多孔盤或培養皿時，請將所需體積等比例放大或縮小。\
T-Pro Non-liposome transfection Reagent II -siRNA複合物的製備和轉染操作步驟
1. 對於不同的細胞型態，T-Pro Non-liposome transfection Reagent II (μL)：siRNA (μg)較佳的比例為1：1~4：1。在一開始時，我們採用的比例為3：1，且通常可以得到滿意的轉染效率且不具細胞毒性。在某些特殊狀況下，可嘗試改變混和比例以達到最佳轉染效果。為了確保混合物的最佳效果，我們建議採用不含血清及抗生素之細胞培養液或HBS buffer(pH7.4 150m M NaCl, 20m M HEPES)對T-Pro Non-liposome transfection Reagent II進行稀釋。以下轉染操作流程適用於24孔細胞培養盤，其他培養盤之用量可依據其體積稍作調整，在表2有提及其他形式培養皿的轉染條件可供參考。
2. 以24孔細胞培養盤每孔為例，取30μl (不含血清及抗生素)細胞培養液或HBS buffer(pH7.4 150mM NaCl, 20mM HEPES)。
3. 取siRNA 5~50 nmol 加入到步驟2中均勻混合。
4. 取T-Pro Non-liposome transfection Reagent II 1~5μl 加入到步驟3中siRNA之混合物均勻混合，經混合後於室溫下靜置15分鐘。
5. 將步驟4之混合物取均勻滴於盤內(含有細胞及血清培養液)，並以前後左右搖晃的方式使其均勻混合。
6. 將轉染後之細胞置於37℃ 含5％ CO2的培養箱中培養。
7. 經18至48小時後確認轉染及表現效率。
注意：若需轉染其他多孔盤或培養皿時，請將所需體積等比例放大或縮小。
注意：siRNA溶液濃度，需在1μM 以上使用。
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